目的:观察穴位埋线对"虚、瘀"状态下溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠黏膜上皮紧密连接的影响

并探讨其作用机制。方法:60只雄性SD大鼠随机分为对照组(12只)和造模组(48只)

采用腺嘌呤、番泻叶分阶段灌胃制备大鼠"虚、瘀"状态

然后用5%2

4

6-三硝基苯磺酸(TNBS

100 mg/kg)加0.25 mL 50%乙醇灌肠诱导大鼠UC模型。选取造模成功的30只大鼠随机分为模型组、药物组和埋线组

每组10只。埋线组取双侧"足三里""天枢""膈俞""脾俞""肾俞""大肠俞"穴进行埋线治疗

每14天1次

共3次;药物组采用柳氮磺吡啶肠溶片灌胃治疗

每日1次;对照组、模型组和埋线组同时予等量0.9%氯化钠溶液

均干预42 d。观察各组大鼠的一般情况及体质量变化

采用肉眼及HE染色观察大鼠结肠组织外观及形态学变化

ELISA法检测各组大鼠血清中钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的含量

实时荧光定量PCR法检测各组大鼠结肠组织肠黏膜上皮紧密连接蛋白occludin、claudin1、claudin2、ZO-1 mRNA水平

Western blot法检测各组大鼠结肠组织肠黏膜上皮紧密连接蛋白occludin、claudin1、claudin2、ZO-1及CaM KⅡ、MLCK的蛋白水平。结果:与对照组比较

模型组大鼠体质量下降(P<0.01)

结肠组织明显肿胀

出血

大量炎性细胞浸润

结肠组织学损伤指数评分升高(P<0.01)

血清CaM KⅡ和MLCK含量升高(P<0.01)

结肠组织occludin、claudin1和ZO-1 mRNA和蛋白水平降低(P<0.01)

claudin2 mRNA和蛋白水平升高(P<0.01)

CaMKⅡ和MLCK蛋白水平升高(P<0.01)。与模型组比较

药物组和埋线组大鼠体质量增加(P<0.01)

结肠病变明显减轻

组织学损伤指数评分降低(P<0.01)

血清CaMKⅡ和MLCK含量降低(P<0.01)

结肠组织内occludin、claudin1和ZO-1 mRNA和蛋白水平增高(P<0.01

P<0.05)

claudin2 mRNA和蛋白水平降低(P<0.01)

CaMKⅡ和MLCK蛋白表达水平降低(P<0.01

P<0.05)。埋线组和药物组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:穴位埋线能修复肠黏膜上皮紧密连接

降低肠黏膜上皮通透性

其机制可能与降低CaMKⅡ、MLCK等蛋白激酶的表达有关。