目的:基于上游磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide 3-kinases

PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B

AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin

mTOR)信号通路观察艾灸"百会""风府""大椎"穴对淀粉样前体蛋白/早老素1 (amyloid precursor protein/presenili1

APP/PS1)双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease

AD)小鼠脑内β-淀粉样蛋白(amyloidβ-peptide

Aβ)清除作用的影响。方法:将60只APP/PS1双转基因AD小鼠随机分为模型组、艾灸组、雷帕霉素组、艾灸+抑制剂组

每组15只

15只同龄同背景C57BL/6J雄性小鼠作为对照组。艾灸组小鼠实按灸"百会"、温和灸"风府"和"大椎"

每次20 min

每日1次

治疗2周;雷帕霉素组用雷帕霉素(rapamycin)腹腔注射给药

2 mg·kg-1·d-1

治疗2周;艾灸+抑制剂组在艾灸组治疗基础上同时予以3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine

3-MA)腹腔注射给药

1.5 mg·kg

(-1)

·d(-1)·d

(-1)

治疗2周;对照组和模型组动物常规饲养2周

不进行任何干预。用免疫组化技术检测小鼠皮质和海马脑区Aβ_(1-42)表达水平

透射电镜观察小鼠海马脑区自噬体的形成

免疫印迹法检测小鼠海马组织PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-m TOR的蛋白表达。结果:与对照组比较

模型组皮质区和海马脑区Aβ_(1-42)蛋白表达增多(P

<

0.01);与模型组比较

艾灸组、雷帕霉素组和艾灸+抑制剂组皮质区和海马脑区Aβ_(1-42)蛋白表达减少(P

<

0.01);与艾灸组比较

雷帕霉素组皮质区和海马脑区Aβ_(1-42)蛋白表达差异无统计学意义(P

>

0.05)

艾灸+抑制剂组皮质区和海马脑区Aβ_(1-42)蛋白表达增多(P

<

0.01);与雷帕霉素组比较

艾灸+抑制剂组皮质区和海马脑区Aβ_(1-42)蛋白表达增多(P

<

0.01)。模型组神经细胞胞质内自噬泡和细胞器减少;艾灸组自噬泡较多

可见不规则变形、萎缩的细胞器;雷帕霉素组可看到较多自噬泡

尚有变形的细胞器;艾灸+抑制剂组偶可观察到少量的自噬泡

可见较多变形、萎缩的细胞器。与对照组比较

模型组PI3K、Akt、p-Akt、m TOR、p-m TOR蛋白表达显著升高(P

<

0.01);与模型组比较

艾灸组、雷帕霉素组和艾灸+抑制剂组小鼠PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达均明显下降(P

<

0.01);与艾灸组比较

雷帕霉素组小鼠PI3K、Akt、p-mTOR蛋白表达略有升高(P

<

0.01)

艾灸+抑制剂组PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达显著升高(P

<

0.01);与雷帕霉素组比较

艾灸+抑制剂组小鼠PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达显著升高(P

<

0.01)。结论:艾灸督脉可加速自噬清除APP/PS1双转基因AD小鼠脑内的Aβ_(1-42)蛋白异常沉积

其作用机制可能与艾灸督脉抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路异常激活有关。